华中科技大学同医院曹非等研究团队
研究表明养血清脑颗粒（CG）可以改善脑微循环，缓解血管痉挛，但是关于CG改善脑缺血/再灌注（I/R）损伤的研究尚缺乏。近日，笔者及所在团队的其他成员在《中国神经再生研究（英文版）》（NuralRgnrationRsarch,11:）上发表了一篇文章，对这一问题进行了探讨，结果表明，CG对I/R有神经保护作用。现摘取文章主要内容与读者分享。
背景及方法CG是复方中药，可改善脑微循环，缓解血管痉挛，通常用来治疗头晕、头痛、慢性脑供血不足、高血压和失眠。主要成分是当归、川芎、白芍、熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索、细辛等。CG的活性成分由一系列酸（原儿茶酸、咖啡酸、绿原酸、迷迭香酸、阿魏酸）和芍药苷组成。这些成分均可在CG灌胃后大鼠的血液中检测出。通过促进血管新生、降低炎症反应、改善凝血功能和血流变，进而改善脑I/R损伤的预后。本实验旨在通过建立大鼠短暂性大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，检测CG对I/R损伤后血管新生、炎症反应、凝血功能、血流变以及脑梗死面积的影响。
研究纳入只40~50天龄雄性大鼠，平均随机分为5组：假手术组、I/R组、CG0.3g/ml组、CG0.1g/ml组，CG0.03g/ml组。使用改良线栓法，制成大鼠右侧大脑MCAO模型。假手术组除不插入线栓外手术方法与模型组相同。用蒸馏水将CG稀释为0.3g/ml、0.1g/ml、0.03g/ml组药液。在I/R手术前连续灌胃7天，I/R手术后、缺血2小时拔出线栓，形成再灌注，之后开始继续给予CG灌胃，每天一次，持续3天或7天。假手术组和I/R组给予同等量的生理盐水。通过博森（Brdson）评分和改良卡赛（GaciaJH）评分对各组大鼠进行神经功能评估，通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法进行脑梗死体积测定，并进行免疫组化检测、蛋白质印迹法（WstrnBlot）检测、酶联反应吸附测定（ELISA）法检测、凝血功能及血流变学检测。
结果1CG改善I/R后神经功能评分Brdson评分结果显示，假手术组没有神经功能损伤，I/R组大鼠神经功能损伤严重。与I/R组相比CG治疗组大鼠神经功能改善。其中高剂量治疗组在I/R后2~5天时差异显著（P0.05），中剂量治疗组在I/R后4天时差异显著（P0.05）（表1）。改良的GaciaJH评分结果显示，假手术组没有神经功能损伤，与I/R组相比，CG0.3g/ml治疗组在I/R后3h及1、2、4、5、7天时差异显著（P0.05，表2）。
表1I/R术后不同时间Brdson评分变化
说明：评分越高，神经功能损伤越重；*与I/R组比较，P0.05
表2I/R术后不同时间改良GaciaJH评分变化
说明：评分越低，神经功能损伤越重；*与I/R组比较，P0.05
2CG缩小I/R大鼠脑梗死灶体积通过TCC染色法进行评估后显示，假手术组没有脑梗死，I/R组大鼠有较大的脑梗死体积。与I/R组比，CG0.3g/ml及0.1g/ml治疗组梗死体积缩小。
3CG增加脑组织VEGF及降低IL-1β蛋白表达与I/R组比，CG0.3g/ml及0.1g/ml治疗组血管内皮生长因子（VEGF）免疫阳性细胞明显增加，CG0.3g/ml治疗组白介素（IL）-1β免疫阳性细胞明显减少。
4CG增加脑组织Ang-1及VEGF蛋白表达Wstrnblot检测显示I/R7天后，与假手术组相比模型组血管紧张素（Ang）-1及VEGF蛋白表达增加。CG0.3g/ml治疗组及CG0.1g/ml治疗组Ang-1及VEGF的表达较I/R组增加。
5CG增加缺血脑组织IL-10蛋白表达I/R术后3天ELISA检测显示，与I/R组相比，CG0.3g/ml组IL-10蛋白表达明显增加。I/R组与假手术组比较，IL-10的含量有增加的趋势，但差别不显著。
6CG改善I/R后凝血功能I/R术后7天，与I/R组相比，CG0.3g/ml组凝血酶原时间（PT）、国际标准化比值（INR）、凝血酶时间（TT）延长，纤维蛋白原（Fbg）含量降低。与I/R组相比，CG0.1g/ml组PT延长。与假手术组比较，I/R组Fbg含量增加，PT、INR、TT降低，但差异不显著。
7CG改善I/R后血液流变学I/R术后3天，与I/R组相比，所有CG组全血粘度（ηb）及血浆粘度(ηp)指标改善。CG0.3g/ml组红细胞聚集指数（EAI）较I/R组降低。与假手术组比较，I/R组ηb增加，ηp及EAI有增加的趋势，但差异不显著。
讨论既往研究发现，CG治疗可以减轻大鼠局灶性I/R损伤后血脑屏障的破坏，减轻脑水肿，还可以抑制白细胞的粘附及微血管白蛋白的渗漏，改善脑微循环，降低海马细胞凋亡。本实验利用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，进一步探讨了CG保护脑缺血再灌注损伤的作用机制。
血管新生在卒中后功能恢复过程中起重要作用，VEGF和Ang是在新生血管形成过程中起关键作用的因子。本实验表明，梗死交界区的棕黄色胞浆染色主要呈胶质、神经元及内皮细胞样，提示VEGF阳性表达；CG治疗促进I/R后血管再生因子VEGF及Ang-1的表达。
炎症是I/R损伤的机制之一，也是影响预后的重要因素。IL-1β通常被认为是炎症级联反应的始动因子，能上调粘附分子的表达，并与核转录因子（NF）-κB、肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）-γ相互作用，参与缺血后的炎症反应。IL-10是抑止炎症反应的因子。研究发现，大鼠脑梗塞后脑组织及血清IL-1β的含量增加，给予人参皂苷治疗后，IL-1β的含量降低。研究发现，大鼠脑梗死后1天和7天，缺血侧脑组织内IL-10的信使核糖核酸（mRNA）及蛋白含量增加，骨髓间充质干细胞注射治疗后，IL-10在两个时间点的表达量均增加。本研究显示，CG治疗上调I/R后IL-10的表达，下调IL-1β的表达。
凝血功能障碍和血小板功能亢进是血栓形成的重要机制。凝血功能及血流变功能紊乱在血栓形成和脑梗死的发生和病理过程中起着重要作用。本实验显示，CG具有改善I/R损伤后凝血功能及血流变的作用。
本实验选用两种被广泛采用的神经功能评分标准。Brdson评分主要检测大鼠的运动功能，改良GaciaJH评分除了检测大鼠的运动功能外，还检测感觉功能。与神经功能评分相比，TTC染色法可以直观的测定脑梗死体积。本实验结果显示，CG改善局灶性I/R大鼠的神经功能评分并缩小脑梗死体积。
总之，本实验结果表明CG改善局灶性I/R大鼠的神经损伤，促进血管新生因子的表达，调节炎症介质，改善凝血功能及血流变指标。CG是脑梗死的一种有效的辅助治疗药物。但其具体机制还需进一步研究证实。我们计划通过计数新生血管及炎症细胞数量来进一步研究CG对血管新生及炎症反应的影响。另外，CG具有多种成分，具体起作用的成分及不同成分间是否具有协同作用，仍不明确。关于CG是否具有促进局灶性I/R损伤后神经再生的作用也有待进一步研究。
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