一、试验目的
观察丹酚酸对阻断大脑中动脉造成的大鼠局灶性脑缺血的神经功能症状、脑梗塞面积及脑含水量的影响。
二、试验材料
1.动物
Wistar雄性大鼠，体重-克，由中国医学科学院动物中心提供。
合格证号：医动字第01-号。
2.仪器
KW65－3A型高频电刀由北京医用电子仪器厂生产；SXP－1B型手术显微镜为上海医用光学仪器厂产品；恒温水浴箱为产品；P/G－培养/干燥箱由重庆试验设备厂生产。
3.药品与试剂
丹酚酸：批号
丹酚酸粉针剂：批号，（每mg含丹酚酸mg）
以上药品均由本所黎莲娘和陶忠华教授提供，复方丹参注射液为黄山天目药业股份有限公司产品，批号：。四氮唑兰(TTC)由中国人民解放军军事医学科学院生产，化学纯，批号：。
4.被测药物配制方法
丹酚酸粉针剂，丹酚酸用灭菌生理盐水配成所需浓度。
5.被测药物剂量及给药途径
丹酚酸粉针剂27、13.5、6.75mg/Kg，丹酚酸20、10、5mg/Kg
复方丹参注射液2、1g/Kg，均由舌下静脉注射。
6.试验组的设置
采用雄性Wistar大鼠，随机分为9组：假手术组，对照组(iv生理盐水)，丹酚酸粉针剂27、13.5、6.75mg/Kg3组，丹酚酸()20、10、5mg/Kg3组，及复方丹参注射液2、1g/Kg2组。
7.被测药物的保存方法
临用时稀释，40C冰箱保存，连续使用3天。
三、试验方法
1.大鼠局灶性脑缺血试验
大鼠经水合氯醛mg/Kgip麻醉后，左侧卧位固定于鼠板上，于手术显微镜下沿外耳道与眼眦连线中点切开皮肤，暴露出颧弓，用小牵张器将鳞状骨和下颌骨间距撑开，与颅骨底开一1cm×1cm的骨窗，撕开硬脑膜，暴露出大脑中动脉，用高频电刀电凝阻断一侧大脑中动脉造成局部脑缺血，逐层缝合切口。术中、术后室温严格控制在24～C。
除假手术组外，其他各组均阻断一侧大脑中动脉。在阻断一侧大脑中动脉30min后，由舌下静脉给药，24h后，参照文献方法判断神经症状，然后断头取脑，测定脑含水量。
另取Wistar雄性大鼠，分组及给药同前，在阻断一侧大脑中动脉后24h，断头取脑，参照文献方法测定脑梗塞面积。
2.脑梗塞面积的测定
将剥离完整的大脑放入40C冰箱内盛有生理盐水的小杯中，10min后，去除嗅球、小脑及低位脑干，沿冠状面切为5片，立即放入TTC染色液中，避光在C水浴中温孵30min。取出脑片放入10％福尔马林液中固定。正常组织为玫瑰红色，缺血组织呈白色。用重量求积法测定梗塞面积，计算梗塞区域占全脑面积的百分比。
3.神经症状评分判断标准
a.提起大鼠尾部,观察两前肢情况，正常动物两前肢向前伸直并且对称。
手术后，脑缺血半球的对侧前肢内收，肩内旋。观察其程度不同评为0－4分。
b.牵拉两肢，正常大鼠肌力对称，手术后脑缺血半球的对侧前肢肌无力，观察其程度不同评为0－3分。
c.推两肩，正常大鼠为双侧肩阻力对称，手术后脑缺血半球的对侧肩阻力下降，观察其程度不同评为0－3分。
根据以上标准，满分为10分，分数越高，说明脑功能障碍越严重。以此作为脑功能障碍的指标。
4．脑含水量的测定
用干湿法测定脑含水量。动物处死后，取出全脑，去除嗅脑，低位脑干及小脑，立即称取脑湿重，置C烘箱中烘烤18h至衡重后称脑干重。脑含水量公式为：脑含水量(%)=(脑湿重-脑干重）/脑湿重*%
四、实验结果
1.丹酚酸针剂及丹酚酸对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响
如表1所示，丹酚酸20、10mg/Kg，丹酚酸粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著缩小大鼠MCAO24h后的脑梗塞面积，与对照组比较，有显著差异。且二者作用相当，无显著性差别。丹酚酸10mg/Kg、丹酚酸粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。
表1.丹酚酸及丹酚酸粉针剂iv对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响
组别
剂量(mg/Kg)
脑梗塞面积（%）
对照组
7.25+3.16
丹酚酸粉针剂
27
3.81+1.03**
13.5
4.67+1.29*
6.75
5.75+1.33
丹酚酸
20
3.82+1.07**
10
4.67+1.44*
5
5.76+1.37
复方丹参注射液
4.59+1.18*
0
5.91+1.46
*p〈0.05,**p0.01与对照组比较n=10
2.丹酚酸及丹酚酸粉针剂对MCAO大鼠神经功能症状的影响
对照组大鼠麻醉清醒后即有偏瘫样症状出现，主要表现为手术对侧前肢内收、肩内旋、前肢肌张力下降，向手术对侧推动时抵抗阻力下降。丹酚酸20、10mg/Kg，丹酚酸粉针剂27、13.5mg/Kg，可显著改善神经功能症状，与对照组比较，有显著差异，且二者作用相当，无显著性差别。丹酚酸10mg/Kg、丹酚酸粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。
表2.丹酚酸针剂及丹酚酸对MCAO大鼠神经功能症状的影响
组别
剂量（mg/kg）
症状评分
假手术组
3.46+1.44***
对照组
7.18+1.75
丹酚酸粉针剂
27
3.97+1.76**
13.5
5.10+1.30*
6.75
5.98+0.98
丹酚酸
20
3.98+1.92**
10
5.05+1.62*
5
6.01+1.26
复方丹参注射液
4.99+1.71*
0
6.08+1.74
*p〈0.05,**p0.01与对照组比较n=10
3．丹酚酸及丹酚酸粉针剂对MCAO大鼠脑含水量的影响
如表3所示，阻断大鼠一侧中动脉24h后，对照组的脑含水量为82.82+1.29，而假手术组的脑含水量为80.91+0.79，二者相比有显著差别，提示阻断一侧中动脉24h后，阻断侧脑半球形成了严重水肿。丹酚酸20、10mg/Kg，丹酚酸粉针剂27、13.5mg/Kg，可显著减轻缺血性脑水肿,且二者作用相当，无显著性差别。丹酚酸10mg/Kg、丹酚酸粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液注射2g/Kg作用相当。
.表3．丹酚酸针剂及丹酚酸iv对MCAO大鼠脑含水量的影响
组别
剂量（mg/kg）
脑含水量（%）
假手术组
80.91+0.79**
对照组
82.82+1.29
丹酚酸粉针剂
27
80.99+0.90**
13.5
81.52+1.07*
6.75
82.01+0.85
丹酚酸()
20
81.00+0.86**
10
81.50+0.87*
5
82.07+1.02
复方丹参注射液
81.55+0.61*
0
82.42+0.92
*p〈0.05,**p0.01与对照组比较n=10
五、实验结论
1.用电烧灼法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO)造成大鼠局部脑缺血，且在阻断侧脑半球形成了严重水肿。
2.丹酚酸20、10mg/Kg，丹酚酸粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著改善神功能症状，与对照组比较，有显著差异，丹酚酸与丹酚酸针剂二者作用相当，无显著差别。丹酚酸10mg/Kg，丹酚酸粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。
3.丹酚酸20、10mg/Kg，丹酚酸粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著缩小大鼠MCAO24h后的脑梗塞面积，与对照组比较，有显著差异,且二者作用相当，无显著性差别。丹酚酸10mg/Kg、丹酚酸粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。
4.丹酚酸20、10mg/Kg，丹酚酸粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著减轻缺血性脑水肿，而其小剂量作用不明显；丹酚酸与丹酚酸粉针剂二者作用相当；丹酚酸20、10mg/Kg，丹酚酸粉针剂13.5mg/Kg、与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。
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